由於引起灰指甲的真菌種類繁多，所以只依靠直接鏡檢法來鑑別真菌比較困難，有時候真菌菌絲在病甲中數量少，不容易找到，這給直接鏡檢真菌帶了很大的麻煩。直接鏡檢法最爲常用的方法包括，氫氧化鉀液製備標本的方法和染色法。該檢查方法僅供讀者瞭解和參考，患有灰指甲的朋友一定要在正規醫院的醫生指導下進行檢查和治療。
1. 氫氧化鉀液製備標本的方法
採集標本的方法和注意事項，之前已經做了詳細的闡述，這裏就不重複介紹了。將刮取的甲屑置於清潔的玻璃載片上，加1-2滴10%-20%的氫氧化鉀溶液，加蓋玻片後微微加熱，有助於溶解角蛋白和排出玻片之間多餘的氣泡，但一定要注意不要過度加熱，以免因溶液燒乾而形成結晶。待角質層細胞溶開、變薄後即可鏡檢，在取下的標本中可以找到菌絲和孢子，也可以看見假菌絲或着色的芽胞等。甲屑標本在氫氧化鉀液真菌鏡檢後，根據所見到的不同菌絲、孢子的結構大致可以考慮由某種真菌感染引起灰指甲。有時候，一次鏡檢或許不足以認定，需要再次取材進行檢查。
2.染色法
標本經氫氧化鉀消化之後，用多種染色方法可以增加直接鏡檢的敏感性，能夠更好的分辨出不同的菌種。如派克墨水或熒光染色法，染色法均比單純使用氫氧化鉀液處理的標本陽性率高。所以，染色法可以與氫氧化鉀法同時進行，這樣不僅可以使觀察到的菌絲和孢子結構更清晰，還可以使觀察到的菌絲和孢子與標本中的其它成分相區分。
